MS-MLPA的原理

發(fā)布時間： 2025-06-09　　點擊次數(shù)： 641次

甲基化特異性MLPA (MS-MLPA) 是SALSA®^MLPA®^®技術的一種變體。通過MS-MLPA，可以同時對多個目標進行半定量的甲基化分析。

MS-MLPA 探針

如同常規(guī)MLPA探針混合物，MS-MLPA探針混合物包含靶向特定基因組序列的探針。每個探針由兩部分組成：左探針寡核苷酸（LPO）和右探針寡核苷酸（RPO）。MS-MLPA探針混合物中的某些探針靶向包含甲基化敏感性HhaI內切酶限制位點的區(qū)域。這些探針可用于甲基化分析。

MS-MLPA的原理

探針與樣品DNA上的目標序列雜交。然后使用HhaI酶消化未甲基化的雙鏈探針-DNA復合物。

與未甲基化樣本DNA形成的復合物會被消化。消化后的探針無法呈指數(shù)級擴增，因此不會產(chǎn)生信號。與甲基化樣本DNA形成的復合物不會被HhaI消化，并將產(chǎn)生正常信號。

MS-MLPA 反應

MS-MLPA 的步驟與MLPA的步驟非常相似。重要的區(qū)別是反應在過夜雜交后被分為未消化和已消化的反應。

未消化的反應用于拷貝數(shù)測定。在消化反應中，用于甲基化分析，HhaI酶與Ligase-65酶同時加入。

數(shù)據(jù)分析

Coffalyser™ 用于分析數(shù)據(jù)?？截悢?shù)與常規(guī) MLPA 的方法相同，通過未消化反應來確定。DNA 樣品中的甲基化百分比是通過將消化反應中的每個探針信號與未消化反應中的相應信號進行比較來確定的。

完成

對您的MLPA數(shù)據(jù)進行完整分析。

質量

對您的樣品和實驗進行廣泛的的質量控制。

Coffalyser™ 是 免費的、用戶友好型 MLPA 分析軟件，由 MRC Holland 開發(fā)和支持，幫助您充分利用您的數(shù)據(jù)。

高級質量控制

一個專為MLPA設計的高級質量檢查系統(tǒng)幫助您評估從片段分離的質量和MLPA反應到參考樣品的再現(xiàn)性的一切內容。這些檢查有助于防止您基于不良數(shù)據(jù)得出結論，并提高您對結果可靠性的信心。

可視化您的數(shù)據(jù)的所有方面

Coffalyser 允許您以多種方式可視化和分析您的數(shù)據(jù)。您可以查看電泳圖、表格，或專注于帶有拷貝數(shù)比率的圖表。對于更復雜的病例和故障排除，您可以查看中間分析步驟的結果。要討論或存儲您的結果，您可以將總結導出為 PDF。

獲取新信息

關于我們的產(chǎn)品的新信息可以直接從Coffalyser內部從我們的服務器獲取。這確保了您在收到新產(chǎn)品后即可開始分析。Coffalyser的更新始終是免費的，確保您始終從新的見解中受益。

入門指南

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分析證書

COA 版本 04；發(fā)布于 2021 年 5 月 28 日

SALSA MLPA

SALSA® MLPA® 試劑盒分析證書

目錄編號	EK1-FAM，EK1-Cy5，EK5-FAM，EK5-Cy5，EK20-FAM
產(chǎn)品名稱	SALSA MLPA 試劑盒
規(guī)格	100、500 或 2000 次反應
運輸條件	干冰或冷卻元件
儲存條件	到貨后存放在 - 25°C 至 - 15°C 之間
有效期	MLPA 試劑有效期：見附錄 A（在推薦條件下儲存時）。本產(chǎn)品凍融次數(shù)不得超過 25 次
用途	本試劑盒僅用于與 SALSA（MS-）MLPA 探針組合結合，按（MS-）MLPA 通用協(xié)議進行（MS-）MLPA 分析
質量控制標準	- 使用專用質量控制探針組合測試雜交速度、連接酶 - 65 活性和聚合酶活性。新舊批次之間的引物峰變異 < 20%。參考樣本群體內和樣本群體內的變異 < 10%（大標準差 0.10）。殘留引物 % 低于 40%。專用測試探針的探針比率在 0.8-1.2 之間。無 DNA 反應僅顯示 64、70、76 和 82 nt 的對照片段。 - 通過使用與 PCR 引物具有廣泛同源性的 LPO 混合物，對 PCR 引物混合物進行類似引物二聚體的峰形成測試。類似引物二聚體的峰低于探針峰平均高度的三倍。 - 對連接酶緩沖液 B 進行批次間電導率變異測試，變異 < 10%。 - 使用 5 ng DNA 對引物峰變異進行測試（不適用于連接酶緩沖液 A 和連接酶 - 65）。變異應≤20%。 - 穩(wěn)定性測試（在 37°C 下孵育 1 周）。新舊批次之間的引物峰變異 < 20%。參考樣本群體內和樣本群體內的變異 < 10%（大標準差 0.10）。殘留引物 % 低于 40%。專用測試探針的探針比率在 0.8-1.2 之間。無 DNA 反應僅顯示 64、70、76 和 82 nt 的對照片段。傾斜度 < 60%。
測試結果	合格

本證書是生產(chǎn)過程中的分析聲明。所有檢測均按照制造商的使用說明進行。本 COA 是適用于所有 SALSA MLPA 試劑盒批次的通用證書。有關批次詳情，請見附錄 A

品牌是MRC Holland MRC Holland北京z代理 MRC Holland 天津z代理 MRC Holland深圳z代理 MRC Holland 上海z代理 MRC Holland湖北z代理 MRC Holland湖南z代理 MRC Holland江蘇z代理 MRC Holland河南z代理 MRC Holland河北z代理 MRC Holland石家莊z代理 MRC Holland深圳z代理 MRC Holland廣東z代理

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