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Promega
產(chǎn)品時間:2020-05-18
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產(chǎn)品貨號

產(chǎn)品名稱

品牌

G9211

Anti-HaloTag® Monoclonal Antibody

Promega

E1500

Luciferase Assay System

 promega

E2691

FuGENE? 6 Transfection Reagent

 promega

G7572

CellTiter-Glo? Luminescent Cell Viability Assay

promega

E6120

ONE-Glo? Luciferase Assay System

Promega

E4550

Luciferase 1000 Assay System

Promega

G7572

CellTiter-Glo? Luminescent Cell Viability Assay

promega

A3500

Reverse Transcription System

 promega

U1515

dNTP Mix

 promega

G8091

Caspase-Glo® 3/7 Assay

Promega

E2620

Bright-Glo™ 螢光素酶檢測系統(tǒng)

promega

M1801S

T4 DNA Ligase

promega

G7892

CytoTox-ONE™ Homogeneous Membrane Integrity Assay

promega

V5113

Sequencing Grade Modified Trypsin

promega

G9243

CellTiter-Glo® 2.0 Assay

promega

G9242

CellTiter-Glo® 2.0 Assay

promega

Z5342

MagneSphere® Technology Magnetic Separation Stands

promega

G3581

CellTiter 96® AQueous One Solution Cell Proliferation Assay (MTS)

promega

G7572

CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay

promega

v1062

Chymotrypsin, Sequencing Grade

promega

v1 651

Glu-C, Sequencing Grade

promega

G7892

CytoTox-ONE™ Homogeneous Membrane Integrity Assay

promega

P1193

Nuclease-Free Water

promega

V4251

TBE Buffer, 10X, Molecular Biology Grade

promega

V2011

SoftLink™ Soft 1Release Avidin Resin

promega

V5113

TNM-FH (Liquid) - HyClone Insect Cell Culture Media

promega

V5113

Sequencing Grade Modified Trypsin

promega

E6120

ONE-Glo™ 螢光素酶報告基因檢測系統(tǒng)

promega

G9243

CellTiter-Glo® 2.0 Cell Viability Assay

promega

E6120

ONE-Glo™ 螢光素酶報告基因檢測系統(tǒng)

Promega

E2691

FuGENE 6 轉(zhuǎn)染試劑

promeg

E2940

Dual-Glo® 雙螢光素酶報告基因檢測系統(tǒng)

promega

P1171

DTT, Molecular Grade (DL-Dithiothreitol)

promega

G7892

CytoTox-ONE™ Homogeneous Membrane Integrity Assay

promega

E4651

pGL4 52[luc2P STAT5RE Hygro] Vector

promega

G7572

CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay

promega

V4251

TBE Buffer, 10X, Molecular Biology Grade

promega

V5113

Sequencing Grade Modified Trypsin

promega

E2520

Steady-Glo® 螢光素酶檢測系統(tǒng)

promega

E2661

Glo Lysis Buffer, 1X

promega

P1171

DTT, Molecular Grade (DL-Dithiothreitol)

promega

E4982

ViaFect™ Transfection Reagent

promega

V5113

Sequencing Grade Modified Trypsin

promega

E4530

Luciferase Assay System

promega

E6120

ONE-Glo™ 螢光素酶報告基因檢測系統(tǒng)

Promega

V5113

Sequencing Grade Modified Trypsin, Frozen

promega

E2620

Bright-Glo™ 螢光素酶檢測系統(tǒng)

promega

E1500

Luciferase Assay System

 promega

E6120

ONE-Glo? Luciferase Assay System

promega

G7892

 

CytoTox-ONE™ Homogeneous Membrane Integrity Assay,

promega

E2940

Dual-Glo® 雙螢光素酶報告基因檢測系統(tǒng)

promega

G7572

CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay

promega

G7572

CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay

promega

E6120

ONE-Glo™ 螢光素酶報告基因檢測系統(tǒng)

promega

E6120

ONE-Glo™ 螢光素酶報告基因檢測系統(tǒng)

promega

G1780

CytoTox 96® Non-Radioactive Cytotoxicity Assay

promega

 

 

產(chǎn)品種類齊全,北京華新康信與國外諸多生命科學(xué)領(lǐng)域*合作眾多,代理品牌Glycan Therapeutics,Intact Genomics,Integral Molecular,Medkoo,Niomech,Terragene,Anshlabs wako,EZbioscience,CMCTAG,Anatrance ,F(xiàn)avorage ,Affinity,Advanced biomatrix,bioplastics,天地人和,TRC,凱杰,義翹,sciencell;價格優(yōu)勢品牌:seracare,Streck,Toxin,Zeptometrix,sigma,F(xiàn)orteBio,CanSyn,polyplus,santa,chormsystems,bethyl ,moltox, permagenlabware ,bioflux,Bio-Rad, coriell,   listlabs, ZYMO , ABclonal  , EY laboratories  ,greatcellsolar , agdia , beckman , Bioxcell,,biomax ,usascientific , TRC ,nist ,americanelements,cayman  , Fisher ,thermofisher ,  nanopore,   日立,  三菱株式會社 ,RD, takara等,緊跟生命科學(xué)的發(fā)展,不斷滿足客戶的需求,為各位的科研之路上添磚加瓦!

 

 

抗HaloTag®單克隆抗體  Anti-HaloTag® Monoclonal Antibody

G9211_Anti-HaloTag--單克隆抗體_3

針對HaloTag®蛋白的單克隆抗體

與其他非HaloTag®蛋白幾乎沒有交叉反應(yīng)

可以通過Western blot檢測低0.5–1ng的HaloTag®融合蛋白

以1mg / ml的濃度提供

尺寸:200mg

Anti-HaloTag®單克隆抗體是針對HaloTag®蛋白的小鼠單克隆抗體,可用于通過Western blot檢測HaloTag®融合蛋白。 HaloTag®平臺滿足了細(xì)胞成像,蛋白質(zhì)純化和蛋白質(zhì)下拉應(yīng)用中功能蛋白質(zhì)分析的靈活性需求。了解有關(guān)HaloTag®技術(shù)的更多信息。

 

應(yīng)用:完整的HaloTag®融合蛋白的免疫學(xué)檢測,專門用于蛋白質(zhì)印跡。蛋白質(zhì)印跡的建議工作稀釋度為PBS中的1:1,000。

 

通訊協(xié)定

完整協(xié)議

HaloTag®技術(shù):專注于成像技術(shù)手冊

 

1.HaloTag®技術(shù)和細(xì)胞成像簡介了解蛋白質(zhì)的功能作用以及它們?nèi)绾卧诩?xì)胞內(nèi)相互作用越來越重要。通常需要多次重組蛋白融合才能完成這項研究,由于在不同應(yīng)用之間移動效率低下,有時可能很慢且麻煩。結(jié)果,需要提供在表達和定位,蛋白質(zhì)純化,蛋白質(zhì)相互作用發(fā)現(xiàn),篩選和進一步的功能分析之間具有靈活性的重組蛋白質(zhì)標(biāo)簽。 HaloTag®平臺(a–g)滿足了功能蛋白分析靈活性的需求。這種模塊化技術(shù)基于融合標(biāo)簽和合成配體之間共價鍵的形成,旨在全面表征細(xì)胞和生化環(huán)境中蛋白質(zhì)的功能。有多種HaloTag®配體(a–g)和試劑盒可用于熒光細(xì)胞成像和蛋白質(zhì)捕獲/純化,以及可定制的反應(yīng)性配體構(gòu)建基塊(a,e,f)。 HaloTag®報告基因蛋白是水解酶的一種工程化,無催化活性的衍生物,可與HaloTag®配體形成共價鍵(圖1)。在生理條件下,該共價鍵快速形成且高度特異性且基本上不可逆,從而形成即使在嚴(yán)格條件下也穩(wěn)定的復(fù)合物(1-3)。 HaloTag®蛋白是33kDa的單體蛋白,不是哺乳動物,植物或大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)源的;因此,沒有非特異性活性水平,只有高標(biāo)記特異性。該技術(shù)已成功用于許多系統(tǒng),包括:哺乳動物細(xì)胞(4),細(xì)菌(5),酵母(6),植物(7)和動物模型(8)。

使用HaloTag®熒光配體進行細(xì)胞成像的優(yōu)勢在于可以地進行標(biāo)記的時空控制:HaloTag®技術(shù)的模塊化性質(zhì)以及與配體的快速結(jié)合動力學(xué),可以對蛋白質(zhì)運輸和周轉(zhuǎn)進行直接成像。由于可用的配體既具有變化的熒光光譜,也具有細(xì)胞滲透和不滲透的特性,因此用戶可以對標(biāo)記進行空間和時間控制。例如,研究人員只能用不滲透細(xì)胞的配體標(biāo)記膜結(jié)合蛋白的表面池,并跟蹤其生物學(xué),內(nèi)在化或其他命運?;蛘呖梢韵扔靡环N“顏色”的配體標(biāo)記蛋白質(zhì),然后在一段時間后再次用含有不同顏色的染料的配體標(biāo)記蛋白質(zhì)。這種脈沖追蹤標(biāo)記允許直接觀察蛋白質(zhì)隨時間的運輸和/或更新。

 

圖1.HaloTag®融合蛋白顯示了與TEV位點成比例的連接子以及與HaloTag®配體共價相互作用的結(jié)合袋。標(biāo)記活細(xì)胞,然后對活細(xì)胞或固定細(xì)胞進行成像,和/或直接運行凝膠進行定量:所有HaloTag®熒光配體均允許對活細(xì)胞進行標(biāo)記和成像。根據(jù)您的工作流程需要,可以通過一個清洗步驟(一個小時內(nèi))快速完成標(biāo)簽,或者使用無洗程序進行一整夜的標(biāo)簽。由于HaloTag®融合蛋白和配體之間共價鍵的穩(wěn)定性以及染料本身的穩(wěn)定性,也可以對通過標(biāo)準(zhǔn)免疫細(xì)胞化學(xué)方案操作的固定細(xì)胞進行成像。這種穩(wěn)定性還允許使用熒光掃描儀通過SDS-PAGE直接分析標(biāo)記的細(xì)胞。僅設(shè)計一個可用于多種應(yīng)用程序的基因構(gòu)建體:無需設(shè)計和克隆新的表達構(gòu)建體即可獲得新功能。除細(xì)胞成像外,相同的融合蛋白還可以純化為單個純蛋白,或者與它的搭檔一起下拉以發(fā)現(xiàn)新的蛋白相互作用。使用HaloLink™樹脂從HaloTag®熒光配體轉(zhuǎn)換為HaloTag®純化和下拉系統(tǒng),可有效捕獲和回收HaloTag®融合蛋白或復(fù)合物。

 

 

用戶要提供的材料(解決方案組合物請參見第9.B節(jié)。)•裝有表達HaloTag®融合蛋白的細(xì)胞的密閉玻璃蓋罩•37°C時適合細(xì)胞使用的完整培養(yǎng)基•培養(yǎng)基中缺少酚紅37°C(可選)•1X PBS(pH 7.5,可用于洗滌)•共聚焦顯微鏡或?qū)捯曇盁晒怙@微鏡,配有合適的濾光片組和/或激光器(請參見第9.A節(jié)和圖2)•37°C + CO2細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)箱1.在即將加入細(xì)胞之前,在溫暖的培養(yǎng)基中制備HaloTag®配體的1:200稀釋液。這是5倍的工作液解決方案。 2.用5XHaloTag®配體工作儲備溶液替換現(xiàn)有體積的五分之一,標(biāo)記細(xì)胞,并輕輕混合。因此建議的終標(biāo)記濃度建議為5µM TMR。 3.5µM AlexaFluor®660; 1µM diAcFAM,OregonGreen®或AlexaFluor®488;和10µM香豆素配體。 3.在37°C + CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育15分鐘。 4.對于可透過細(xì)胞的配體,請用等體積(或更大體積)的溫暖新鮮培養(yǎng)基(或1X PBS [pH 7.5])輕輕替換含配體的培養(yǎng)基。重復(fù)兩次,以溫暖的*培養(yǎng)基結(jié)束,共進行三遍*漂洗,然后繼續(xù)執(zhí)行步驟5。對于細(xì)胞不滲透的配體(含AlexaFluor®的配體),請用相等(或更大)的濃度替換含配體的培養(yǎng)基體積的溫?zé)嵝迈r培養(yǎng)基兩次,然后進行步驟7。因為它們不滲透細(xì)胞,所以這些配體不需要洗去未結(jié)合的配體。 5.在細(xì)胞培養(yǎng)箱中于37°C + CO2的*培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞30分鐘,以洗滌未結(jié)合的配體。 6.用等體積的新鮮溫?zé)崤囵B(yǎng)基替換培養(yǎng)基。使用缺少酚紅的培養(yǎng)基可以改善成像效果。 7.轉(zhuǎn)移顯微鏡,并捕獲圖像。

 

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