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Proteintech
產品時間：2020-05-18
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產品貨號 | 產品名稱 | 品牌 |
11422-1-AP | Marcksl Antibody | Proteintech |
10934-1-ap | Cyclin D2 Antibody | proteintech |
10586-1-AP | STMN2 Antibody | proteintech |
MARCKSL1抗體1出版物
兔多克隆| 貨號：11422-1-AP
物種特異性：人類，老鼠
在以下位置檢測到正白平衡：人腦組織
在以下方面檢測到陽性IHC：人肺癌組織，人肝癌組織，人胰腺癌組織
注意：建議使用pH 9.0的TE緩沖液進行抗原回收；（*）或者，可以用pH 6.0的檸檬酸鹽緩沖液進行抗原修復
推薦稀釋度：
白平衡：1：500-1：1000
IHC：1：20-1：200
取決于樣品，在“驗證”選項卡中檢查數據
產品信息：
資源：兔子
純化方法：抗原親和純化
同型：IgG抗體
存儲：具有0.1％疊氮化na和50％甘油pH 7.3的PBS。儲存于-20 Ô C. 等分是不必要的-20 ö下儲存。
免疫原信息：
免疫原MARCKSL1融合蛋白Ag1967
全名：類馬克1
計算分子量：195aa，20 kDa
觀察分子量：48 kDa的
GenBank登錄號：BC007904
基因編號（NCBI）：65108
基因符號MARCKSL1
同義字F52，Mac MARCKS，MACMARCKS，MARCKS like 1，MARCKS like protein 1，MARCKS related protein，MARCKSL1，MLP，MLP1，MRP
背景 ：
MARCKS樣蛋白1（MARCKSL1）在神經組織中廣泛表達，也稱為MARCKS樣蛋白（MLP）或MARCKS相關蛋白（MRP），屬于MARCKS家族，它是PKC的高酸性豆蔻?；易宓孜飶V泛分布在包括巨噬細胞在內的各種細胞類型中。由于SDS凝膠上的異常遷移或磷酸化，該蛋白質的計算分子量為20 kDa，表觀分子量為42-48 kDa。MARCKSL1的遺傳破壞導致神經管閉合缺陷，依賴于肌動蛋白功能，細胞形狀和細胞遷移的協(xié)調控制的事件。人們認為MARCKSL1調節(jié)肌動蛋白的細胞骨架，從而參與主要的細胞反應，例如吞噬作用，分泌，運動，有絲分裂和膜運輸。
免疫印跡和免疫沉淀方案：
細胞裂解液的制備：
將RIPA緩沖液添加到細胞中（100μL放入35 mm皿中，200μL放入60 mm皿中，500μL加入100毫米培養(yǎng)皿），同時將培養(yǎng)皿置于冰上。刮擦細胞并輕輕搖動懸吊在冷藏室中的搖桿或定軌振動器上15分鐘裂解細胞。用浴超聲儀在冰水中超聲處理，直樣品不再粘稠。在4℃下以12000 g的速度離心細胞5分鐘以去除沉淀。移動上清液換一個新鮮的管。細胞裂解物的終濃度將為2-3μg/μL。對于白平衡，添加4×SDS檔緩沖裂解液1×SDS終濃度。
免疫印跡：
1.煮沸10分鐘后，將20-50μL樣品上樣SDS PAGE。對于大多數蛋白質，建議每泳道上樣量使用30-80μg總裂解物蛋白質，因為細胞中80％的蛋白質種類的濃度非常低。
2.將凝膠浸入蛋白質印跡轉移緩沖液中。大多數情況下建議使用PVDF膜蛋白質。將膜浸入甲醇中1-2分鐘，然后將膜浸入轉移緩沖液10分鐘，然后將其放在厚厚的緩沖液濾紙疊上。然后用另一疊浸有緩沖液的濾紙覆蓋它。掩蓋轉移儀器。凝膠應在膜的負極。
3.以1 mA / cm2的電流運行90分鐘。
4.將膜在封閉緩沖液中于室溫下孵育1小時或過夜在4℃。用洗滌緩沖液洗滌膜3×5分鐘。
5.用封閉緩沖液稀釋一抗。在37℃下孵育膜1.5小時室內溫度。用洗滌緩沖液洗滌膜3×5分鐘。
6.用封閉緩沖液稀釋二抗。在37℃下孵育膜1小時室內溫度。用洗滌緩沖液洗滌膜3×5分鐘。
7.用洗滌緩沖液洗滌膜3×10分鐘。
8.用ECL顯色。
免疫沉淀：
1.將200-350μL細胞裂解液（包含1-3 mg總蛋白）轉移到微量離心管中。
2.向細胞（或預先清除的）裂解物中添加150-300μL孵育緩沖液和1-4μg一抗。jia抗體濃度應通過滴定確定。用對照IgG建立陰性對照實驗（對應于原發(fā)性抗體來源）。輕輕搖動在4℃下孵育2-4小時或過夜。
3.加入50μLProtein A或G Sepharose微珠漿液以捕獲免疫復合物。將混合物在4℃輕輕搖動1-4小時。
4.取下端蓋，從旋轉柱底部釋放上清液。必要時，重懸磁珠混合物以提高流速。
5.用含1x蛋白酶抑制劑的1x TBST將珠子洗滌5次。后之后洗滌，將旋轉柱在4℃下于500 g離心30秒，然后收集上清液并丟棄。
6.將離心柱放在新的微量離心管中，合并洗脫液。洗脫沉淀用40μl洗脫緩沖液在4℃下于8000-10000g離心1分鐘，重復一次用新的40μl洗脫緩沖液洗脫。
7.在洗脫液中加入10μl堿中和緩沖液和30μl4×樣品緩沖液，在95-100℃5分鐘。將其保存在-20℃或在SDS-PAGE上加載20-40μl，并通過WB。
組織培養(yǎng)細胞免疫熒光的協(xié)議：
1.在小的圓形玻璃蓋上培養(yǎng)細胞。
2.用4％PFA或有機溶劑在4℃固定細胞20分鐘（如果您使用固定的有機溶劑，則只需跳過第3步，然后直接進行第4步）。
3.將玻璃杯準確轉移5分鐘0.2％Ttiton X-100-PBS中。
4.在室溫下用BSA-PBS封閉細胞1h，或在4℃下過夜。
5.在蓋玻片上加入50μL特異性一抗，并在室溫下孵育1小時在潮濕的容器中加熱溫度。用PBS清洗蓋板三遍。
6.在每個蓋玻片上加入50μL熒光標記的第二抗體，并在黑暗中于潮濕的容器中于室溫下孵育1小時。
7.將蓋玻片安裝在15％的甘油中或少量載玻片上。
8.用指甲油在邊緣上密封蓋玻片。
石蠟包埋的組織切片的免疫組織化學方案：
1.在2種二甲苯中對載玻片進行脫蠟處理，一次40分鐘，另一次20分鐘。
2.將玻片轉移到100％酒精，95％酒精，80％酒精，60％酒精和ddH2O中每次5分鐘。
3.將載玻片放在裝有抗原回收緩沖液的容器中，并在中間放置微波以進行操作。幾分鐘（700 W烤箱），讓回收溶液在室溫下冷卻。
4.用TBS沖洗2×5分鐘。
5.通過在3％H2O2溶液中孵育切片來阻斷內源性過氧化物酶活性ddH2O 10分鐘。
6.用TBS沖洗2×5分鐘。
7.在室溫下在TBS中封閉5-10％的山羊血清30分鐘。
8.排干幻燈片幾秒鐘（請勿沖洗）并擦拭圓形部分。
9.應用在TBS中組成的一抗。在室溫或4℃下孵育1小時過夜。
10.用TBST沖洗2×5分鐘。
11.在室溫下應用Envision二抗30分鐘。
12.用TBS沖洗2×5分鐘。
13.在室溫下用發(fā)色團（DAB）顯影，在顯微鏡下觀察。
14.用自來水沖洗5分鐘。
15.在市長的蘇木浴中復染30-60秒。
16.在水浴中洗7-8次，然后自來水3分鐘。
17.用60％，80％，95％和100％的酒精分別脫水5分鐘。
18.轉移到二甲苯中5分鐘。通風30分鐘。
19.安裝
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