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產(chǎn)品展示PRODUCTS
R010B Takara
產(chǎn)品時(shí)間：2020-07-10
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PrimeSTAR HS DNA聚合酶
高保真PCR
PrimeSTAR HS DNA聚合酶是一種新型的高保真DNA聚合酶，可高效擴(kuò)增大型DNA產(chǎn)物（人基因組DNAgao8.5 kb；λDNAgao22 kb）。由于強(qiáng)大的3'→5'核酸外切酶活性，其卓yue的校對能力可實(shí)現(xiàn)其出色的性能?？贵w介導(dǎo)的熱啟動(dòng)（HS）功能可提高特異性，從而減少背景，并證明在要求苛刻的克隆和測序應(yīng)用中非常有用。PrimeSTAR HS 具有靈活方便的格式：
各個(gè)組件-Primeme HS HS DNA聚合酶配有5X PrimeSTAR Buffer（含Mg 2+）試管和dNTPs管。
2X PCR預(yù)混液-包含PrimeSTAR HS DNA聚合酶，反應(yīng)緩沖液和dNTP的預(yù)混液，用于簡單方便的PCR設(shè)置和少的移液步驟。
通過直接測序分析可以計(jì)算PrimeSTAR HS DNA聚合酶的保真度，與其他常用的間接表型分析（例如lacI）相比，可以提供對摻入錯(cuò)誤率的更真實(shí)估計(jì)。由于固有的致死和沉默突變，其他酶供應(yīng)商經(jīng)常使用的計(jì)算方法（如lacI）容易出錯(cuò)。
PrimeSTAR HS DNA聚合酶因其*的啟動(dòng)效率而還具有出色的擴(kuò)增效率和快速的反應(yīng)時(shí)間。使用僅5–15秒的短退火時(shí)間即可實(shí)現(xiàn)高特異性擴(kuò)增。
對于ju挑戰(zhàn)性的PCR應(yīng)用，PrimeSTAR HS的增強(qiáng)版本可輕松擴(kuò)增富含GC的序列，甚具有更高的保真度，并適用于長距離PCR：
具有GC緩沖液的PrimeSTAR HS可對困難的富含GC的樣品（75％或更高）提供可靠的高保真擴(kuò)增。
PrimeSTAR Max產(chǎn)品提供了所有Takara Bio產(chǎn)品gao的保真度和kuai的擴(kuò)展時(shí)間。
PrimeSTAR GXL產(chǎn)品具有高保真度，并具有擴(kuò)增長且富含GC或AT的目標(biāo)的能力。
減
R010B PrimeSTAR®HS DNA聚合酶 1,000伙
一種高保真熱啟動(dòng)（HS）PCR DNA聚合酶，由于其強(qiáng)大的3'5'核酸外切酶活性而具有出色的校對能力。PrimeSTAR HS DNA聚合酶可有效擴(kuò)增高達(dá)8.5 kb的人類基因組DNA靶標(biāo)或22 kb的lambda DNA。酶隨附了優(yōu)化的緩沖液（Mg 2+加）和dNTP混合物的單獨(dú)試管。貓。＃R010B包含4個(gè)Cat。＃R010A。請參考目錄。＃R010A了解完整的產(chǎn)品文檔和資源。
R010A PrimeSTAR®HS DNA聚合酶 250伙 *
一種高保真熱啟動(dòng)（HS）PCR DNA聚合酶，由于其強(qiáng)大的3'5'核酸外切酶活性而具有出色的校對能力。PrimeSTAR HS DNA聚合酶可有效擴(kuò)增高達(dá)8.5 kb的人類基因組DNA靶標(biāo)或22 kb的lambda DNA。酶隨附了優(yōu)化的緩沖液（Mg 2+加）和dNTP混合物的單獨(dú)試管。
總覽
高精度和強(qiáng)大的核酸外切酶活性，導(dǎo)低的錯(cuò)誤率（每250 kb僅12個(gè)錯(cuò)誤）
與標(biāo)準(zhǔn)Taq聚合酶相比，擴(kuò)增效率更高
即使使用富含GC的模板也具有出色的性能
對變化的反應(yīng)條件具有高度的耐受性（單個(gè)PCR循環(huán)方案可用于擴(kuò)增大小不同的產(chǎn)物）
使用人類基因組DNA擴(kuò)增靶標(biāo)8.5 kb，使用大腸桿菌基因組DNA 擴(kuò)增靶標(biāo)10 kb，使用lambda DNA 擴(kuò)增靶標(biāo)22 kb
由于提高了啟動(dòng)效率，反應(yīng)時(shí)間短
熱啟動(dòng)PCR酶可防止由于錯(cuò)誤的引物或引物消化而在反應(yīng)組裝過程中發(fā)生錯(cuò)誤的引發(fā)事件
更多信息
應(yīng)用領(lǐng)域
高保真PCR
cDNA文庫的擴(kuò)增
用于蛋白質(zhì)表達(dá)的cDNA克隆
定點(diǎn)誘變和突變基因分型（例如，SNP分析）
有關(guān)保真度比較的注意事項(xiàng)
我們使用測序分析來確定摻入錯(cuò)誤率，因?yàn)榇蠖鄶?shù)需要高保真擴(kuò)增的研究人員都執(zhí)行以下操作：PCR，克隆和測序。因此，通過直接序列分析確定錯(cuò)誤率與大多數(shù)研究人員在自己的應(yīng)用程序中使用的方法非常接近。請注意，使用不同保真度測量方法（例如，直接測序，Kunkel方法，Cline方法，lac I方法）獲得的值不能直接產(chǎn)生可比數(shù)據(jù)。
純度
將0.6 µg超螺旋pBR322 DNA或lambda DNA與10個(gè)單位的酶在74°C孵育1小時(shí)后，既未檢測到切口，內(nèi)切核酸酶，也未檢測到核酸外切酶活性。
存儲(chǔ)
運(yùn)輸和存放于–20°C。避免反復(fù)凍融和劇烈攪拌。解凍后，分配到PCR管中并儲(chǔ)存在–20°C。
性能
使用λDNA（擴(kuò)增的片段：8、10、12、15 kb）和人基因組DNA（擴(kuò)增的片段：0.5、1、2、4、6、8 kb）作為模板，通過單片段PCR證實(shí)了酶促性能。
PCR產(chǎn)品
使用PrimeSTAR HS DNA聚合酶獲得的大量PCR產(chǎn)物的末端會(huì)變鈍。結(jié)果，PCR產(chǎn)物可以直接克隆到平末端載體中。如有必要，在克隆前將PCR產(chǎn)物磷酸化。
批量，自定義和OEM信息
如果您對批量購買，定制包裝，定制配方（包括無甘油和高濃度）或合作機(jī)會(huì)感興趣，請聯(lián)系我們，以討論您的需求或訪問我們的OEM頁面以提交查詢。
其他產(chǎn)品信息
有關(guān)存儲(chǔ)條件，產(chǎn)品組件和技術(shù)規(guī)格的信息，請參閱產(chǎn)品的分析證書。請參閱套件組件列表以確定套件組件。分析證書和試劑盒組件列表位于“文檔”選項(xiàng)卡下。
3.0常見問題
3.1：PrimeSTAR™建議的退火條件是什么？
Takara建議以下退火條件：
初始退火溫度應(yīng)以55°C為起點(diǎn)。
退火時(shí)間：由于PrimeSTAR具有很高的灌注效率，因此將退火時(shí)間設(shè)置為5秒?；?5秒
根據(jù)Tm值。較長的退火時(shí)間會(huì)導(dǎo)致涂污。
當(dāng)Tm *＞ 55℃時(shí)：5秒。
當(dāng)Tm * ＜55℃時(shí)：15秒。
使用以下方法計(jì)算Tm值：* Tm計(jì)算公式：Tm（°C）= 2（NA + NT）+ 4（NC + NG）-5
僅對<25個(gè)堿基的引物使用此方法。對于引物> 25個(gè)堿基，將退火溫度設(shè)置為5秒。
注意：請按照提供的指導(dǎo)進(jìn)行操作。
3.2：何時(shí)應(yīng)使用3步與2步PCR循環(huán)方案？
通常，建議使用三步協(xié)議。但是，在瓊脂糖上觀察到產(chǎn)品涂抹時(shí)
凝膠電泳，或使用Tm> 70°C的引物時(shí)，建議使用兩步操作方案。
3.3：瓊脂糖凝膠電泳后，我觀察到我的PCR產(chǎn)物有污跡。問題是什么？
通常在PCR條件不理想時(shí)會(huì)觀察到PCR產(chǎn)物的涂片。嘗試使用以下一項(xiàng)或多項(xiàng)建議來修改PCR循環(huán)條件：
-減少退火時(shí)間，例如如果以15秒進(jìn)行退火，則將時(shí)間減少到5秒。
-將退火溫度提高到58-65°C。
-從3步切換為2步循環(huán)協(xié)議。
3.4：我的PrimeSTAR™反應(yīng)中獲得的PCR產(chǎn)物數(shù)量很少，觀察到很少或沒有觀察到
產(chǎn)品在我的瓊脂糖凝膠上。如何增加產(chǎn)量？
通常，PCR產(chǎn)物量少是引物與DNA模板退火不正確的結(jié)果。嘗試修改
您的退火條件：
-延長退火時(shí)間，例如如果執(zhí)行退火5秒鐘，則將時(shí)間延長到15秒鐘，或者
將退火溫度降50-53°C。
3.5：PrimeSTAR™反應(yīng)中建議的模板DNA推薦量是多少？
PrimeSTARTM反應(yīng)中使用的模板DNA的合適量隨DNA來源的不同而不同：
人類基因組DNA 5-500 ng
大腸桿菌基因組DNA 100 pg -100 ng
λDNA 10 pg-10 ng
質(zhì)粒10 pg-1 ng
3.6 dNTPs的濃度可以修改嗎？
過量的dNTP具有螯合作用，較高的dNTP濃度會(huì)降低反應(yīng)混合物的有效Mg2 +濃度。隨附的5X PrimeSTAR™緩沖液可提供1 mM的終Mg2 +反應(yīng)混合物終濃度
優(yōu)化后的dNTP終濃度為200μM。因此，dNTP的濃度不應(yīng)
被修改。
3.7：我的PrimeSTAR™產(chǎn)品的瓊脂糖凝膠電泳應(yīng)使用哪種緩沖液？
建議將TAE Buffer用于使用PrimeSTAR™獲得的擴(kuò)增產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳
HS DNA聚合酶。使用TBE緩沖液可能會(huì)導(dǎo)致DNA條帶模式在凝膠底部擴(kuò)大。
3.8：PrimeSTAR™產(chǎn)生哪種類型的PCR產(chǎn)物末端？
用PrimeSTAR™HS DNA聚合酶擴(kuò)增的所有PCR產(chǎn)物均具有平末端。因此，他們可以直接
可克隆到平端載體中（如有必要，可在克隆前進(jìn)行磷酸化），但不能克隆到T載體中。
3.9：PrimeSTAR™產(chǎn)品在進(jìn)行限制性酶切消化之前是否需要任何特殊處理？
在對擴(kuò)增的PCR產(chǎn)物進(jìn)行限制性酶切消化之前，通過苯酚/lv仿萃取從反應(yīng)混合物中除去所有痕量的PrimeSTAR™HS聚合酶。特別是對于3'突出的限制酶，例如
Pst I，這些酶產(chǎn)生的3'突出末端，在消化過程中可能會(huì)被3'-5'核酸外切酶活性刪除
剩余量的PrimeSTAR™HS聚合酶。
3.10：我可以在測序反應(yīng)中直接使用PrimeSTAR™產(chǎn)品嗎？
Takara建議在直接測序之前，先用酚/lv仿提取PCR產(chǎn)物，以確保滅活任何剩余的3'-5'核酸外切酶聚合酶活性
北京華新康信生物科技有限公司專注于生命科學(xué)領(lǐng)域，由豐富從業(yè)經(jīng)驗(yàn)的技術(shù)團(tuán)隊(duì)和管理團(tuán)隊(duì)組建而成，主營生物化學(xué)試劑，儀器，實(shí)驗(yàn)耗材等。廣泛的產(chǎn)品輻射領(lǐng)域，試劑，耗材，儀器等。 takara takara 北京代理 takara 華北代理， takara 華東代理， takara 華南代理， takara 華中代理， takara 代理， takara 代理， takara 代理 北京華新康信生物科技有限公司 takara 產(chǎn)品， takara 現(xiàn)貨， takara 各系列產(chǎn)品， takara 知識介紹， takara 技術(shù)服務(wù)， takara 咨詢服務(wù)， takara 合作服務(wù)，歡迎電聯(lián)，真誠合作，合作共贏。
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