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Emsdiasum常見問題解答
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Emsdiasum產(chǎn)品-緩沖液
Emsdiasum產(chǎn)品-緩沖液 Emsdiasum常見問題解答
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我應(yīng)該使用什么樣的粒度？
始終使用最小的顆粒大小來適合您的應(yīng)用?；谳^小顆粒的共軛比基于較大顆粒的共軛更有效。如果使用較小的粒子難以顯示，則可以使用銀增強(qiáng)來放大這些粒子，這是Ultra Small系列共軛物的備條件。新的銀增強(qiáng)系統(tǒng)AURION SE-EM提供均勻高效的增強(qiáng)。
金綴合物真的比其他綴合物更傾向于背景嗎？
不這個(gè)童話故事來源于這樣一個(gè)事實(shí)，即金共軛物是基于粒子的，而可視化也是基于單獨(dú)的粒子的。與酶和熒光標(biāo)記相反，金綴合物更像一個(gè)數(shù)字系統(tǒng)，要么它們?cè)谀抢?，然后你?huì)看到它們，要么它們不存在。酶和熒光標(biāo)記很快被認(rèn)為是“類似物"標(biāo)記，它們?cè)跈z測(cè)中的可見度隨著其局部濃度或酶標(biāo)記產(chǎn)生可見反應(yīng)產(chǎn)物的時(shí)間而增加。對(duì)熒光對(duì)照的無偏見觀察顯示，生物化合物中存在雙鍵所固有的低水平光，最重要的是來自標(biāo)記抗體的熒光。同樣，對(duì)僅用堿性磷酸酶或過氧化物酶標(biāo)記的抗體孵育的對(duì)照樣品進(jìn)行無偏見的觀察，通常會(huì)顯示出樣品的整體染色微弱。這種微弱的水平很容易被接受，甚至在心理上被過濾掉。你不能用金共軛物做這件事，因?yàn)樗鼈兪腔诹Ｗ拥摹?/span>
我應(yīng)該使用二級(jí)金綴合物或蛋白a（或G）嗎？
這取決于你的目標(biāo)是什么。使用次級(jí)綴合物會(huì)產(chǎn)生更高的標(biāo)記密度。因此，人們常說次級(jí)綴合物比蛋白A綴合物更敏感。這在一定程度上是正確的。蛋白質(zhì)A（或G）僅識(shí)別一級(jí)抗體分子上的一個(gè)位點(diǎn)。只有當(dāng)此站點(diǎn)可用且不被其環(huán)境遮擋時(shí)，才會(huì)發(fā)生綁定。次級(jí)綴合物識(shí)別初級(jí)上更多的位點(diǎn)，因此檢測(cè)到初級(jí)抗體的可能性更大。本質(zhì)上，這是靈敏度的提高。
有沒有免疫金（銀）染色的培訓(xùn)計(jì)劃，我可以自己帶標(biāo)本？
EMS和Aurion組織濕式工作坊，您最好使用自己的樣本和初級(jí)抗體。畢竟，這就是你的興趣所在。如果需要，我們將把活動(dòng)擴(kuò)展到其他場(chǎng)地。研討會(huì)持續(xù)兩三天，對(duì)免疫金（銀）染色進(jìn)行了深入探討。參與者人數(shù)有限，以保證最佳教學(xué)。您可以直接聯(lián)系我們了解更多信息。有關(guān)我們研討會(huì)設(shè)置的詳細(xì)信息，請(qǐng)?jiān)L問本網(wǎng)站。
有可能對(duì)細(xì)胞內(nèi)抗原進(jìn)行預(yù)包埋標(biāo)記嗎？
對(duì)單細(xì)胞是最合適的。植物材料有一層厚厚的不可穿透的墻，而不是。超小型金綴合物是選的綴合物。在許多情況下，NaBH4的滲透步驟足以打開樣品并允許試劑滲透。低濃度的溫和清潔劑，如皂苷，有助于清潔。需要強(qiáng)調(diào)的一點(diǎn)是：必須延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間，因?yàn)楸仨殞?shí)現(xiàn)試劑對(duì)內(nèi)部抗原的全滲透。為了在孵育后去除未反應(yīng)的試劑，必須同樣調(diào)整洗滌程序！《Aurion通訊》第5期討論了這個(gè)話題。請(qǐng)參閱本網(wǎng)站的其他地方。
如何驗(yàn)證我的綴合物是否仍然有效？
有一個(gè)簡(jiǎn)單的程序來檢查這一點(diǎn)。它在Aurion的通訊#4中有非常詳細(xì)的描述，一些信息可以在本網(wǎng)站的“通訊"部分找到。簡(jiǎn)而言之：你需要一個(gè)硝基纖維素條，從一級(jí)抗體的稀釋系列中涂上點(diǎn)，然后用金試劑孵育條。這些點(diǎn)會(huì)被較大的共軛物染成紅色。測(cè)試超小型共軛銀時(shí)，必須應(yīng)用銀增強(qiáng)進(jìn)行可視化。
如何驗(yàn)證銀增強(qiáng)試劑是否仍然正常？
同樣，有一個(gè)簡(jiǎn)單的過程來檢查這一點(diǎn)。它在我們的第4號(hào)通訊中有詳細(xì)描述（請(qǐng)參閱本網(wǎng)站的“通訊"部分）。簡(jiǎn)言之：你需要一個(gè)硝基纖維素條，從你的金綴合物的稀釋系列中涂上點(diǎn)，然后用銀增強(qiáng)試劑孵育條。圓點(diǎn)應(yīng)變成棕黑色。在這段時(shí)間內(nèi)，試劑混合物應(yīng)保持玻璃透明，無任何由自成核引起的可見銀存在。
電子顯微鏡用銀增強(qiáng)試劑SE-EM的活性可以通過向100µl增強(qiáng)混合物中加入10µl稀釋的超小型試劑來測(cè)試。溶液應(yīng)在30-45分鐘內(nèi)變黃。
建議使用過時(shí)的共軛詞嗎？
只要它們的反應(yīng)性良好，并且沒有形成太多的團(tuán)簇，這就沒有問題。金共軛物非常穩(wěn)定。隨著時(shí)間的推移，可能會(huì)有一些蛋白質(zhì)從顆粒表面釋放，但通常這不會(huì)導(dǎo)致反應(yīng)性顯著降低。如通訊#4所述，結(jié)合物的反應(yīng)性很容易通過點(diǎn)點(diǎn)測(cè)試進(jìn)行檢查。根據(jù)結(jié)合蛋白的類型和顆粒大小，簇的形成可能會(huì)隨著時(shí)間的推移而增加。粒子越大，簇越多。這些可以在使用前通過離心稀釋的綴合物來去除。
是否可以使用來自同一動(dòng)物源的兩種抗體進(jìn)行雙重標(biāo)記？
是的，有辦法做到這一點(diǎn)。一種是通過使用具有不同粒徑的蛋白G或蛋白A綴合物。程序是：首先用一級(jí)抗體I孵育，用粒徑較小的蛋白A（或G）檢測(cè)。然后加入過量游離蛋白A或G（50-100µG/ml）孵育。這將幾乎阻斷蛋白A或G的所有結(jié)合位點(diǎn)。接下來，用一級(jí)抗體II孵育第二種抗原，并用更大尺寸的A或G蛋白金綴合物檢測(cè)。第二種可能性是用一級(jí)抗體的混合物進(jìn)行一步孵育，每個(gè)抗體直接用不同的金粒徑標(biāo)記?？商峁┒ㄖ茦?biāo)簽服務(wù)。
我應(yīng)該使用什么樣的網(wǎng)格進(jìn)行銀色增強(qiáng)？
鎳是選材料。黃金網(wǎng)格是不可能的，因?yàn)樗鼈円矊⒈徽R地增強(qiáng)。銅也是如此。無論如何，鎳網(wǎng)格比銅網(wǎng)格更適合免疫培養(yǎng)，因?yàn)殒噷?duì)免疫或酶反應(yīng)更具惰性，毒性更小。鎳網(wǎng)格由于其磁性而令人討厭。通過使用非磁性鑷子或使用電子顯微鏡科學(xué)“美回路"在免疫培養(yǎng)期間將網(wǎng)格從液滴轉(zhuǎn)移到液滴，可以很容易地克服這一問題。
銀增強(qiáng)和OsO4怎么樣？
OsO4固定可在孵育前、孵育后或銀增強(qiáng)后使用。
由于其對(duì)抗原OsO4的破壞作用，當(dāng)打算進(jìn)行免疫培養(yǎng)時(shí)，通常不使用固定。然而，一般來說，銀增強(qiáng)免疫孵育的OsO4固定標(biāo)本不會(huì)造成任何困難。
孵育后可引入鋨固定步驟，以提高樣品的對(duì)比度。如前所述，應(yīng)用銀增強(qiáng)通常不會(huì)造成任何困難。
增強(qiáng)后使用OsO4固定也是可能的，但由于OsO5是一種強(qiáng)氧化劑，它能夠氧化金屬銀，特別是當(dāng)以顆粒形式存在時(shí)。這導(dǎo)致部分銀被去除。一種簡(jiǎn)單的補(bǔ)救方法是將稍微增強(qiáng)的樣品與有限的OsO4固定相結(jié)合，例如1%OsO5分鐘。
我沒有得到積極的結(jié)果，現(xiàn)在怎么辦？
當(dāng)孵育的標(biāo)本看起來和對(duì)照一樣干凈時(shí)，要么（一種或多種）試劑不活躍，要么抗原被破壞、掩蓋或缺失。如通訊#4（請(qǐng)參閱本網(wǎng)站的“通訊"部分）中所述，通過使用點(diǎn)點(diǎn)測(cè)試反向進(jìn)行孵化協(xié)議測(cè)試，很容易找到原因。
首先測(cè)試所用金綴合物上的銀增強(qiáng)試劑（如果使用的話）的活性。如果銀增強(qiáng)是好的，下一步是在使用的一級(jí)抗體上測(cè)試金綴合物，等等。如果它證明問題不在試劑中，你將不得不研究抗原保存。是否應(yīng)進(jìn)行不同的固定？或者不同的嵌入介質(zhì)？使用光顯微鏡對(duì)結(jié)果進(jìn)行評(píng)估，無需繁瑣的EM實(shí)驗(yàn)工作即可回答這些問題。
我有背景問題；這是因?yàn)榻鸸曹梿幔?/span>
當(dāng)標(biāo)本被正確阻斷并且使用了正確的培養(yǎng)緩沖液成分和條件時(shí)，背景水平不應(yīng)干擾特定信號(hào)。某些背景總是存在的：在某種程度上，所有化合物對(duì)其他化合物都有一定的親和力，根據(jù)可用性和濃度，可能會(huì)發(fā)生相互作用。在這方面沒有絕對(duì)的黑白之分。
當(dāng)你放棄了一級(jí)抗體培養(yǎng)，只使用黃金步驟，而你的背景已經(jīng)大大降低，那么你的一級(jí)抗體就會(huì)導(dǎo)致背景。補(bǔ)救措施：通過親和層析（抗血清）和/或交叉吸附純化一級(jí)抗體。如果在不使用初級(jí)培養(yǎng)的情況下，你的背景水平不可接受，那么樣本有可能與金綴合物結(jié)合。
背景可能有許多原因，圍繞三種不同類型的相互作用：
通過在蛋白質(zhì)阻斷步驟之前使用NaBH4或氨酸阻斷步驟消除的殘余固定活性，
對(duì)疏水區(qū)域的粘性（包埋介質(zhì)、富含脂質(zhì)的樣品化合物）。這通過使用適當(dāng)?shù)牡鞍踪|(zhì)阻斷步驟來減少，所述蛋白質(zhì)阻斷步驟涉及部分疏水性蛋白質(zhì)，
基于電荷的相互作用導(dǎo)致帶負(fù)電荷的試劑（如抗體和金綴合物）粘附在樣品中帶相反電荷的區(qū)域（臭名昭著的是組蛋白、一些膠原類型和聚賴氨酸，有時(shí)用于使切片粘在表面）。這種類型的相互作用只能通過向培養(yǎng)基中添加過量的帶負(fù)電荷的無關(guān)分子來克服。Aurion開發(fā)了一種化學(xué)修飾的BSA，稱為BSA-c™ 特別是為此目的。通訊#1提供了深入的信息。新聞稿可在此處在線獲取。
有什么論壇我可以回答關(guān)于標(biāo)簽或顯微鏡的問題嗎？
請(qǐng)隨時(shí)通過電子郵件聯(lián)系我們的幫助臺(tái)，關(guān)于免疫標(biāo)記的問題。
有一些新聞組可能感興趣，如：生物網(wǎng)。細(xì)胞生物、生物網(wǎng)、細(xì)胞生物。細(xì)胞網(wǎng)，bionet.molbio。方法采用免疫細(xì)胞化學(xué)和生物化學(xué)方法。有一個(gè)顯微鏡ListServer，您可以訂閱它，它提供了一個(gè)平臺(tái)，可以從各個(gè)方面詢問有關(guān)光學(xué)和電子顯微鏡的問題。您可以通過向發(fā)送電子郵件進(jìn)行訂閱該消息只需包含“訂閱顯微鏡"一詞。
北京華新康信也有Emsdiasum實(shí)驗(yàn)試劑銷售，下面給大家講講Emsdiasum服務(wù)以及實(shí)驗(yàn)樣本；Moltox ForteBio Moltox ForteBio Moltox ForteBio Moltox ForteBio Moltox ForteBio Toxin toxin toxin toxin toxin toxin toxin toxin toxin toxin toxin toxin toxin toxin Emsdiasum實(shí)驗(yàn) Emsdiasum試劑 Emsdiasum說明 Emsdiasum代理方案Emsdiasum實(shí)驗(yàn)說明 Emsdiasum說明書 Emsdiasum技術(shù)參數(shù) Emsdiasum方案對(duì)比 Emsdiasum優(yōu)勢(shì)介紹 Emsdiasum廣州實(shí)驗(yàn)試劑 Emsdiasum深圳試劑Emsdiasum說明書 Emsdiasum技術(shù)參數(shù)Emsdiasum實(shí)驗(yàn)方案Emsdiasum技術(shù)對(duì)比Emsdiasum購買說明 Emsdiasum天津試劑 Emsdiasum北京試劑Emsdiasum廈門試劑Emsdiasum大理試劑Emsdiasum武漢試劑Emsdiasum福建試劑Emsdiasum安徽試劑Emsdiasum廣西試劑Emsdiasum廈門試劑Emsdiasum常州試劑Emsdiasum安徽試劑Emsdiasum長(zhǎng)沙試劑Emsdiasum哈爾濱試劑Emsdiasum沈陽試劑Emsdiasum深圳試劑Emsdiasum武昌試劑Emsdiasum湖北試劑Emsdiasum湖南試劑Emsdiasum上海試劑Emsdiasum ForteBio實(shí)驗(yàn)試劑，moltox實(shí)驗(yàn)試劑，toxin實(shí)驗(yàn)試劑，ForteBio moltox toxin 各種試劑的實(shí)驗(yàn)參數(shù)，說明書，歡迎咨詢 Emsdiasum代理介紹 Emsdiasum代理介紹 Emsdiasum研究方案
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